گزارش کارآموزی اداره حفظ نباتات استان فارس

گزارش آزمایشگاه

جلسه اول

کشاورزان معتقدند گوگرد برای جلوگیری از تش باد درفصل تابستان کاربرد دارد . اما درواقع درفصول گرم بخصوص دراستانهای جنوبی اگر دردمای 30 درجه سانتیگراد به بالا به گیاه گوگرد داده شود گیاه دچارسوختگی می شود ودرحالت سبز. گیاه خشک میشود وباعث نرسیدن مواد غذائی به ریشه شده وریشه دچار نکروز می شود.علائم موجود برروی این بوته گوجه فرنگی شامل سوختگی برگ پوسیدگی ریشه و محلول پاشی توسط کشاورز بوده است . برای مطمئن شدن از اینکه نکروز ریشه ناشی از قارچ بوده یا خیر ریشه گوجه فرنگی راکشت میدهیم . ابتدا ریشه را شسته تاگل ولای آن کاملا" پاک شود  سپس ریشه را با قیچی قطعه قطعه کرده ودرون ارلن ریخته و100 سی سی آب به آن اضافه کرده ودرب آنرا با فویل می پوشانیم ودرون دستگاه shaker قرار میدهیم به مدت 20 دقیقه ودور 300.

پس از 20 دقیقه یک توری روی ارلن می گذاریم وآب آلوده آن را خارج می کنیم و دوباره 100 سی سی آب به ارلن اضافه کرده و مراحل قبل را انجام می دهیم .

سپس ارلن را به زیر هود برده دستها میز هود و... با الکل ضد عفونی می کنیم.محتوی ارلن را روی توری که روی بشر گذاشتیم می ریزیم . بعد ریشه روی توری را با آب مقطر استریل می شوئیم درون یک پتری دیش محلول وایتکس ریخته وریشه ها را به مدت یک دقیقه درون آن قرار می دهیم. این عمل برای آن است که باکتری های خارجی ریشه از بین بروند . سپس توری را با شعله ضدعفونی می کنیم  و محتوی پتری را روی آن می ریزیم و دوباره آن را با آب مقطر استریل می شوئیم  .

هود

دوعدد کاغذ صافی استریل را روی میز هود گذاشته وقطعات ریشه را روی  آن          میگذاریم و دو عدد کاغذ صافی دیگر را روی آن قرار می دهیم و روی کاغذ فشار وارد کرده تا آب آن خارج  شود .چندین  بار این عمل را انجام داده تا آب ریشه ها کاملا" گرفته شود . بعد ریشه ها را روی دو عدد کاغذ صافی قرار داده دو کاغذ صافی دیگر را روی ریشه ها گذاشته و به مدت دو ساعت زیر هود قرار می دهیم تا کاملا" خشک شود .

ابتدا پنس و قیچی را با الکل ضدعفونی کرده و با شعله حرارت داده و می گذاریم خنک شود .پس ازدو ساعت قطعات ریشه را با پنس و قیچی به قطعات کوچکترتقسیم می کنیم .

برای کشت نیاز به دو محیط  کشتی PDAَ  و  CMA  نیاز داریم . محیط کشت را کنار شعله کمی باز می کنیم و یک قطعه از ریشه را با پنس در وسط محیط قرار می دهیم و پنج قطعه دیگر را در اطراف آن قطعه قرار می دهیم  سپس مشخصات گیاه را روی آن می نویسیم  و چهار پتری را درون یک کیسه گذاشته  هوای آن را کاملا" خارج می کنیم ودرب آن را محکم گره می زنیم  ودرون دستگاه انکوباتور می گذاریم ( بمدت سه روز) .

جلسه دوم

علائم بیماری  گیاه لوبیا شامل  پوسیدگی ریشه و طوقه لوبیا وکشت قبلی زمین گندم وفاقد سم.

تمام مراحل بصورت قبل است  اما سه بار به مدت 20 دقیقه درد ستگا ه shaker قرار می دهیم  سپس نمونه ها را به دو قسمت تقسیم می کنیم   یک قسمت را فقط با آب مقطر استریل می شوئیم یک قسمت را با واتیکس ضد عفونی می کنیم . پس از خشک شدن نمونه ها را در محیط کشت PDA قرار می دهیم .  نمونه های غیر ضدعفونی درپنج محیط ونمونه های ضد عفونی شده را در پنج محیط به روش قیل کشت می دهیم . و هرکدام را جداگانه درکیسه گذاشته و در دستگاه انکوباتور قرار می دهیم .

تهیه محیط کشت PDA:

potato dextrose agar به مقدار 9/5 گرم

agar به مقدار 0/5 گرم

آب مقطر 250 سی سی

محیط کشت  CMA :

corn meal agar مقدار 4/25 گرم

agar به مقدار 0/5گرم

آب مقطر 250 سی سی

محیط کشت YDC :

yeast extera dextrose به مقدار 2/5 گرم

dextrose(glucuse) به مقدار 5 گرم

calcium carbonat به مقدار 5 گرم 

agar به مقدار 3/75 گرم

آب مقطر 250 سی سی

محیط کشت NASَُ

محلول وایتکس برای ضد عفونی 180 سی سی آب + 20 سی سی وایتکس

جلسه سوم

تست لهیدگی

ابتدا یک چاقو را با الکل وشعله ضدعفونی می کنیم سطح یک سیب زمینی را با الکل آغشته کرده چاقو را در سیب زمینی فرو می کنیم . بعد آن را روی شعله می گیریم تا سطح آن کاملا" ضد عفونی شود . تا باکتری ساپروفیت آن از بین رود بعد با یک چاقوی ضد عفونی دیگر پوست آن را گرفته و آن را ورقه ورقه می کنیم .چهار ورق را باالکل ضدعفونی می کنیم و چهارورقه را باشعله ضدعفونی کرده  وهر ورقه را درون یک پتری قرار می دهیم . روی هر ورقه را با کارد شیاری ایجاد می کنیم . سپس با لوپ ضد عفونی شده از باکتری مورد نظر مقداری برداشته و آنرا روی شیار می کشیم . سپس در کف پتری ها مقداری آب مقطر استریل ریخته تاجائیکه آب روی سیب زمینی را نگیرد و درب پتریها رابسته ودر دستگاه انکوباتور قرار می دهیم.

علت ریختن آب این است که محیطی مرطوب برای رشد باکتری ایجاد کنیم .پس از سه روز از رشد باکتری سیب زمینی ها را روی شعله می گیریم اگر لهیدگی ایجاد شد باید سیب زمینی قبل ازکشت با سموم سیستمیک  تیمار شود و سپس کشت شود .

جلسه چهارم

علائم این درخت شامل خشکیدگی درخت و نکروز مقطع ساقه .

برای تست قارچ این درخت از سه نقطه نمونه گرفته وکشت می کنیم که شامل پوست ساقه زیر پوست ساقه ومیانه ساقه است که به ترتیب شامل سه دقیقه ضد عفونی  یک دقیقه و یک دقیقه دیگر ضد عفونی میباشد . پس از ضد عفونی آنها را با آب مقطراستریل شسته وسپس آنها را با کاغذ صافی استریل خشک می کنیم . پس از خشک شدن آنها را به قطعات کوچک تقسیم می کنیم و درمحیط کشت PDA کشت می دهیم . پس از گذشت یک هفته قارچ رشد کرده از پتری زیر پوست ساقه قارچ nattrasia بوده است . اما قارچ قسمت میانه ساقه قارچ ناشناس است .

جلسه پنجم

کشت باکتری

برگ مرکبات که برروی آن جوشهای نارنجی رنگی قرار دارد قطعه قطعه کرده و آن را یک ثانیه در وایتکس ضدعفونی می کنیم و با آب مقطر استریل می شوئیم سپس یک هاون را با الکل ضدعفونی کرده و روی شعله می گیریم پس از خنک شدن هاون برگها را درهاون ریخته و آن را می کوبیم . پس ازچند دقیقه کوبیدن چند قطره آب مقطر روی آن می ریزیم و دوباره می کوبیم تا رنگ عصاره از سبز به سبز کرم رنگ تبدیل شود . عصاره خارج شده از برگ را با لوپ ضد عفونی شده برروی محیط کشت NAS وYDC کشت می دهیم . پس از رشد باکتری نام باکتری xanthomonas است .

جلسه ششم

دستگاه اتوکلاو

دستگاهی است برای استریل آب , کاغذ صافی , محیط های کشت  و غیره .  برای روشن کردن دستگاه ابتدا باید آب کف دستگاه تاقسمت میله های علامت گذاری شده باشد سپس وسایلی که باید استریل شوند را در دیگ اتوکلاو گذاشته درب آنرا می بندیم و پیچهای روی درب دستگاه را یکی یکی محکم می بندیم , دوشاخه دستگاه را درپریز برق میزنیم  دکمه روشن را میزنیم , دمای دستگاه را روی 150 درجه سانتیگراد قرار میدهیم , سوپاپهای هوا را می بندیم و دستگاه شروع به کار می کند پس از شنیدن صدای خارج شدن هوا درجه دستگاه را برروی 100 درجه سانتیگراد بمدت 45 دقیقه قرار میدهیم . پس از اتمام 45 دقیقه دستگاه را خاموش می کنیم و سوپاپ هوا رابه آرامی باز کرده تا هوا خارج شود و سپس درب دستگاه را باز می کنیم .

دستگاه آون

این دستگاه برخلاف اتوکلاو که با رطوبت استریل می کند آون با دمای بالا وسایل را بصورت خشک استریل می کند .

دستگاه سانترفیوژ

این دستگاه به وسیله نیروی گریز از مرکز لوله های آزمایشی حاوی مواد ناهمگن را بصورت همگن درمی آورد وبرای جدا سازی نماتود کاربرد دارد.

دستگاه انکوباتور

دستگاهی است که روی دمای مورد نظر تنظیم می شود تا قارچ وباکتری مورد نظر روی محیط کشت رشد کند.

جلسه هفتم

علائم بیماری درخت سیب : سوختگی جوانه ودمبرگ

ابتدا این قسمتهای سوخته را با قیچی جدا کرده و به مدت یک ثانیه با وایتکس ضدعفونی می کنیم بعد با آب مقطر استریل شسته و آنها را درهاون می کوبیم عصاره خارج شده را با لوپ درمحیط کشتNAS وYDC کشت می دهیم .

علائم بیماری بوته گوجه فرنگی :

زرد شدن مزرعه , ایجاد گالهای کوچک روی ساقه  که ابتدا از پائین بوته بطرف بالا گسترش یافته است و برگها زرد , لوله ای , ترد وشکننده شده است .  

جوشهای روی گیاه را جدا کرده و به مدت یک ثانیه در وایتکس گذاشته و ضد عفونی می کنیم بعد با آب مقطر استریل شسته , آنها را درهاون می کوبیم و عصاره را درمحیط کشت , کشت می دهیم

جلسه هشتم

تنه درخت هلو

برای کشت قارچ از روش flame استفاده می کنیم . ابتدا با پنبه مقداری الکل روی پوست تنه درخت می زنیم , آنرا روی شعله گرفته تا ضد عفونی شود با چاقوی استریل پوست رویی را جدا کرده وقسمت زیر پوسته را جدا می کنیم وآن را قطعه قطعه می کنیم و درمحیط کشت CMA و PDA  کشت می کنیم و در دستگاه انکوباتور قرار می دهیم . عامل بیماری قارچ  nattrasia magnifera میباشد.

جلسه نهم

ریشه وغلاف برنج

علائم مشکوک به شیت بلایت و فوزاریوم و پوسیدگی غلاف. شروع علائم از خزانه بوده است .

قسمتهای مشکوک را قطعه قطعه کرده و هرکدام را جداگانه در دستگاه shaker قرار می دهیم . سپس ریشه و غلاف راهرکدام بمدت 90 ثانیه در وایتکس ضدعفونی کرده و با آب مقطر استریل می شوئیم و پس از خشک شدن در محیط کشت PDA کشت می دهیم و در دستگاه انکوباتور قرار می دهیم .عامل بیماری قارچ fusarium moniliformis میباشد.

ریشه هلو

ابتدا ریشه را شسته تاگل ولای آن کاملا" پاک شود  سپس ریشه را با قیچی قطعه قطعه کرده ودرون ارلن ریخته و100 سی سی آب به آن اضافه کرده ودرب آنرا با فویل می پوشانیم ودرون دستگاه shaker قرار میدهیم به مدت 20 دقیقه.

سپس ارلن را به زیر هود برده دستها میز هود و... با الکل ضد عفونی می کنیم.محتوی ارلن را روی توری که روی بشر گذاشتیم می ریزیم . بعد ریشه روی توری را با آب مقطر استریل می شوئیم درون یک پتری دیش محلول وایتکس ریخته وریشه ها را به مدت یک دقیقه درون آن قرار می دهیم. این عمل برای آن است که باکتری های خارجی ریشه از بین بروند . سپس توری را با شعله ضدعفونی می کنیم  و محتوی پتری را روی آن می ریزیم و دوباره آن را با آب مقطر استریل می شوئیم  .

دوعدد کاغذ صافی استریل را روی میز هود گذاشته وقطعات ریشه را روی  آن میگذاریم و دو عدد کاغذ صافی دیگر را روی آن قرار می دهیم و روی کاغذ فشار وارد کرده تا آب آن خارج  شود .چندین  بار این عمل را انجام داده تا آب ریشه ها کاملا" گرفته شود . بعد ریشه ها را روی دو عدد کاغذ صافی قرار داده دو کاغذ صافی دیگر را روی ریشه ها گذاشته و به مدت دو ساعت زیر هود قرار می دهیم تا کاملا" خشک شود .

ابتدا پنس و قیچی را با الکل ضدعفونی کرده و با شعله حرارت داده و می گذاریم خنک شود .پس ازدو ساعت قطعات ریشه را با پنس و قیچی به قطعات کوچکترتقسیم می کنیم .